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紫外線（UV）吸收法測定核酸的含量2016/6/30
實驗原理核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性質(zhì)，其吸收高峰在260nm波長處。核酸的摩爾消光系數(shù)（或稱吸收系數(shù)）用來表示。為每升溶液中含有1克原子核酸磷的光吸收值（即A值）（表）。測...
單克隆抗體的純化2016/6/29
一、腹水型單抗的純化在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質(zhì)、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡便。1、...
抗體的保存（子科生物）2016/6/29
抗體的保存方法一般有以下三種：一、腹水腹水重組后可加入少量疊氮納等來阻止細菌生長。腹水應當凍存。單抗能夠小包裝保存以避免反復凍融。若要保存較長時間，則不要在4℃。和血清不同，腹水中含有蛋白酶，會使抗體...
小分子抗原制備要點和注意事項2016/6/28
小分子抗原現(xiàn)在做的zui多的是農(nóng)yao和獸藥，這方面的文獻也很多。以前查過一些材料，作者覺得小分子抗原能否制備出高性能的單克隆抗體主要以下幾點決定。1、對于半抗原結(jié)構(gòu)的選擇，如果待測物本身含有NH2，...
大鼠和小鼠尾靜脈注射技巧與經(jīng)驗分享2016/6/28
一、將小鼠固定好，將尾巴拉直，繃緊小鼠姓情較溫順，一般不會咬人，比較容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其它粗糙表面上，在小鼠向前掙扎爬行時，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚，將小...
免疫血清的制備及效價測定2016/6/27
制備免疫血清的傳統(tǒng)方法是將抗原注入動物體內(nèi)，由動物體內(nèi)B細胞增殖分化成漿細胞產(chǎn)生抗體。由于抗原分子（*抗原）具有多種抗原決定簇，每一種抗原決定簇可以激活具有相應抗原受體的B細胞系產(chǎn)生該決定簇的抗體，因...
常用抗原修復方法（子科生物）2016/6/27
用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織切片：1）抗原熱修復可根據(jù)實驗室的具體條件，選用微波爐抗原修復、高壓鍋抗原修復或水浴高溫抗原修復?？乖瓱嵝迯涂蛇x用各種緩沖液，如TBS、PBS、重金屬鹽溶液等，但實驗證明...
生物分子類實驗室常用實驗技術(shù)原理總結(jié)2016/6/24
一、gstpull-down實驗基本原理:將靶蛋白-GST融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當一種“誘餌蛋白”,目的蛋白溶液過柱,可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”...
ELISA實驗中的封閉液等常用試劑的配制2016/6/23
elisa實驗中的封閉液小知識ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點，蔗糖封閉的原理：1、ELISA實驗中，蔗糖本身沒有封閉作用;2、封閉液一般是BS...
細胞凋亡檢測操作步驟之ELISA法2016/6/23
細胞凋亡發(fā)生時，內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將分解核小體區(qū)間的雙鏈DNA，但核小體本身由于由組蛋白緊密結(jié)合而免受切割，單克隆抗體可以與核小體形成夾心結(jié)構(gòu)，可通過檢測核小體判斷細胞是否經(jīng)歷凋亡事件。(一)原理細胞凋...
減少ELISA實驗中背景因素的影響2016/6/22
elisa實驗的原理似乎很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個實驗。在實驗結(jié)束時，我們是否能獲得有意義的...
檢測蛋白磷酸化的六種方法及其優(yōu)缺點2016/6/22
蛋白激酶將磷酸基團從ATP轉(zhuǎn)移到蛋白多肽底物上的絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基，直接影響目標的活性和功能。放射性研究表明，真核細胞中大約30%的蛋白經(jīng)過磷酸化修飾。這一關(guān)鍵的翻譯后修飾調(diào)控了廣泛的細胞活性...
中國科學家新建立一種高靈敏的電化學發(fā)光免疫檢測方法2016/6/22
中國國民核生化災害防護國家重點實驗室防化研究院的研究人員利用elisa技術(shù)以劇毒生物毒素相思子毒素(Abrin)為檢測對象，建立了一種高靈敏的電化學發(fā)光免疫檢測方法。該論文已發(fā)表于近期的《分析化學》雜...
EMSA實驗注意事項及常見問題分析2016/6/21
1.什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗?凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù)，可用于定性和定量分析。這一技術(shù)zui初用于研究DNA結(jié)合蛋白，目...
三種細胞免疫熒光染色操作步驟2016/6/21
免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合來顯示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗結(jié)合，其次是帶有熒光基團的二抗識別并結(jié)合一抗，熒光顯微鏡下即可觀察到熒光，下文主要列舉了三種細胞免疫熒光染色的實驗...
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